干細胞培養基是維持干細胞“干性”（自我更新與多向分化能力）、保證培養質量的核心要素，其使用需嚴格遵循??無菌、精準、適配細胞類型??的原則。以下是覆蓋??通用要求、特殊細胞類型需求、無血清培養基注意事項??的全面指南，結合2025年最新臨床與科研標準整理：  

干細胞培養基的核心注意事項

1.??無菌操作是底線??  

所有操作（培養基配制、細胞接種、傳代、換液）必須在??超凈工作臺??或??生物安全柜??中進行，使用前用75%乙醇擦拭臺面及器械。  

培養基、耗材（培養瓶、移液器吸頭）需經??高壓滅菌??（121℃，20分鐘）或購買無菌產品，避免微生物污染（細菌、真菌、支原體）。  

操作人員需穿實驗服、戴手套、口罩，避免唾液、汗液污染。  

2.??培養基質量控制??  

??選擇合規產品??：要求提供??成分清單、質量合格證明、無菌檢測報告??（如內毒素≤0.25EU/ml）。  

??避免反復凍融??：培養基中的生長因子、蛋白質易因反復凍融失活，需??分裝成小份（1-5ml/管）??，于-20℃避光保存，使用前37℃水浴快速解凍（不超過10分鐘）。  

??檢查外觀與有效期??：使用前觀察培養基是否澄清（無沉淀、渾濁），顏色是否符合要求（如含酚紅的培養基應為桃紅色，pH7.2-7.4）；嚴禁使用過期培養基（一般有效期為6-12個月，具體以產品說明為準）。  

3.??環境參數控制??  

??溫度??：維持在??37±0.5℃??（細胞代謝最適溫度），避免溫度波動（如培養箱門頻繁開啟）。  

??CO?濃度??：5%CO?（維持培養基pH穩定，通過HCO??緩沖系統），需定期校準培養箱的CO?傳感器。  

??濕度??：保持??95%以上??（防止培養基蒸發，導致滲透壓升高），可在培養箱內放置水盤。  

4.??細胞觀察與監測??  

??每日鏡檢??：用倒置顯微鏡觀察細胞形態（如間充質干細胞的梭形、成纖維狀；胚胎干細胞的圓形、克隆狀）、密度（融合度）及是否有污染（如細菌的渾濁、真菌的菌絲）。  

??活力檢測??：傳代或凍存前需檢測細胞活力，活力低的細胞會影響培養效果。  

??定期檢測“干性”??：通過??流式細胞術??檢測干細胞表面標志物，確保未分化狀態。