細胞培養(yǎng)的本質(zhì)是細胞克隆技術(shù)。原理就是盡可能給細胞提供類似于體內(nèi)的環(huán)境，在無菌條件下，給予適當?shù)臏囟群退釅A度以及細胞生長繁殖所必要的營養(yǎng)條件，使其能在體外維持正常的生長繁殖，并保持其結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。

細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用十分廣泛，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究，抗體制備，新藥篩選，基因工程等等都需要用到細胞培養(yǎng)技術(shù)。

貼壁細胞如何高效傳代？

貼壁生長的細胞，在培養(yǎng)瓶或者培養(yǎng)皿長至單層鋪滿的狀態(tài)后后，空間已基本上飽和，細胞生長、增殖受阻，為使其繼續(xù)擴增或生長，需要進行傳代（再培養(yǎng)）處理。同時，傳代培養(yǎng)也可用于細胞種的保存。不僅如此，各種細胞實驗也是以高效的細胞傳代為基礎(chǔ)的。

懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞則需經(jīng)消化等處理后才能分瓶。

一般使用胰蛋白酶，將貼壁細胞消化成成單個細胞，也可加入EDTA提高消化能力（EDTA 是一種二價離子的螯合劑，能抑制細胞膜上的Ca2+和Mg2+）。

常用的細胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA。

實驗時，先用吸去細胞培養(yǎng)上清，用PBS清洗細胞，棄掉洗滌液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(根據(jù)培養(yǎng)皿的大小不同，一般2-5ml消化液即可，以剛好鋪滿整個皿底為原則)，觀察細胞直到細胞變圓脫離瓶壁，此過程一般需要3-5分鐘，為了避免細胞成團，消化細胞的過程中不要拍打細胞瓶。對于特別難消化的細胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細胞置于37°C 促進消化，細胞脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的*培養(yǎng)基中止消化。

800-1000rpm，離心5分鐘，然后棄去中止用的培養(yǎng)基，加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細胞，移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細胞類型而定。胰蛋白酶會對某些細胞的細胞膜產(chǎn)生損傷，對于這種類型的細胞，可用細胞刮輕輕刮下細胞，加入適量的培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻細胞，然后進行傳代培養(yǎng)。

WHO公布的《用動物細胞體外培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品規(guī)程》中的要求：

1、牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家，并應(yīng)具備適當?shù)谋O(jiān)測系統(tǒng)。

2、有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。

3、證明所用牛血清中不含對所生產(chǎn)疫苗病毒的抑制物。

4、血清要通過濾膜過濾除菌，保證無菌。

5、無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國家要求無細菌噬菌體污染。

6、對細胞有良好的支持繁殖作用。

我國對牛血清的質(zhì)量中提出比較嚴格的標準要求：

包括蛋白質(zhì)含量，細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內(nèi)毒素，支持細胞增殖檢查。一款來自澳洲的Ausbian®胎牛血清在市場上頗受歡迎。它具有精選內(nèi)毒素極低、產(chǎn)量充足的血清批次，滿足干細胞、基因敲除、原代培養(yǎng)、細胞典藏、長期傳代等各類細胞的培養(yǎng)要求；澳洲血源，完整的檢測報告及滅病毒服務(wù)，為各類臨床相關(guān)項目的申報提供完整支持等特點。