李斯特菌鑒定試劑盒

HiListeria™ Identification Kit

概況

該試劑盒為標準化的顯色檢測系統，通過李斯特菌特異性的動力學、糖發酵和生化反應進行鑒定。微生物的發酵反應，引起培養基顏色發生變化。

使用說明

待鑒定菌種應先進行分離和純化。可在PALCAM瓊脂（貨號:M1064）或胰蛋白?瓊脂（貨號：M538）（含血或不含血）上挑取一個菌落，接種在５ml腦心浸膏肉湯（貨號：M210）中，在35-37℃培養4-6小時，           直到在620nm處，接種液濁度≥1.0OD。

無菌打開試劑盒，撕掉封條。每孔接種50μl上述菌液。也可用接種環劃線。在35℃-37℃孵育24-48小時。

結果判定

依據結果詮釋表。在第2孔、第4孔和第5孔，在24-48小時孵育期結束后，分別添加如下試劑：

1）觸酶試驗：第1孔

     用接種環刮取第1孔內表面，將接種環蘸到含3%H₂O2的干凈小試管中。

     接種環表面冒泡為陽性。

     接種環表面沒有冒泡為陰性。

     注意：3%的H₂O2需新鮮配置。

2）硝酸鹽還原試驗：第2孔

     加1-2滴對氨基苯磺酸（貨號：R015）和1-2滴N,N-二甲基-1-萘胺（貨號：R009）

     立即出現粉紅色為陽性

     顏色無變化為陰性

3）七葉苷水解試驗：第3孔

     第3孔變為黑色，為陽性反應。

4）伏-普試驗：第4孔

    加3-4滴Barritt試劑A(貨號：R029)和1-2滴Barritt試劑B（貨號：R030）

    10分鐘內出現粉紅色為陽性

    無顏色變化或有輕微變化為陰性。

5）甲基紅試驗：第5孔

     加1-2滴甲基紅試劑（貨號：I007）

     試劑保持紅色為陽性

     試劑脫色變黃為陰性

6）糖發酵試驗：第6孔-第12孔

     酸產生導致培養基顏色由紅變黃，為陽性反應。

     如果仍保持紅色，則為陰性。

12種生化反應

鑒定的李斯特菌物種

格氏李斯特氏菌（Listeria grayi）

單核細胞增生李斯特菌（Listeriamonocytogenes）

英諾克李斯特菌（Listeria innocua）

斯氏李斯特氏菌（Listeria seeligeri）

伊氏李斯特氏菌伊氏亞種（Listeriaivannovii Sub sp. ivannovii）

伊氏李斯特菌倫敦亞種（Listeriaivannovii Sub sp. londoniesis）

威氏李斯特氏菌（Listeria welshimeri）

儲存條件及保質期

2℃-8℃；12個月

引用文獻

A.K.Biswas, etal. Microbial profiles of frozen trimmings and silver sides prepared at Indianbuffalo meat packing plants. Meat Science. 2008,80(2): 418-422

AmirMasoud Shahbazi，et al. Comparativecontamination of Listeria monocytogenes in traditional dairy products inEsfahan Province, Iran. African Journal of Microbiology Research.2013, 7(16):1522-1526

NikiKharel,et al. Microbiological assessment of ethnic street foods of theHimalayas.Journal of Ethnic Foods.2016,3(3):235-241